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血清使用中的常见问题
浏览次数:3700发布日期:2014-09-18

? 如何解冻血清才不会使产品质量受损?
将血清从冷冻箱取出后,推荐将其置于室温下使之完全融解。必须注意的是,融解过程中必须不时地摇晃均匀,血清融解后不可在室温下放置过长时间。
? 血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。
? 如何避免血清中产生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的产生:
1. 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
2. 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
3. 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
4. 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
5. 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
6. 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
? 培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
? 保存血清的方法?
我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
? 为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组
胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES 细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
? 有必要做热灭活吗?
实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对
细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造
成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微
镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又
会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!
? 细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下
观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速
变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可
能与以下几种情况有关:
(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好,反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH 值偏高,不宜细胞生长;
(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
(5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
? 细胞培养中如何防止黑点生成?
(1) 尽可能地减少血清冻融次数。
(2) 培养基无需37℃水浴。
(3) 培养基保持*PH 值7.0- 7.2。
(4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。

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